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  全转录组测序 

全转录组是指特定组织或细胞在特定状态下所有转录产物的总和，包括mrna和各种noncoding rna。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络，如果只是对某个单一rna分子的研究，有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源rna(cerna)理论阐述了一种全新的转录调控模式：cerna包括lncrna、circrna、mrna、假基因等分子能够通过mirna应答元件microrna respe element， mre竞争性地结合相同的mirna来调节彼此的表达水平。举个例子：mirna会导致基因沉默现象发生，而如果lncrna竞争性结合了mirna，陕西pcr，从而影响了mirna基因沉默功能实现。

      cerna是目前转录调控领域的---内容之一，通过全转录组研究能够系统性的阐述cerna的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序---分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究内容，靶向调控网络、cerna网络、共表达网络分析可以将这几种rna联合起来分析，从而发现新的调控网络模型。去除rrna的链特------，---，含有的rna信息含量十分丰富，通过测序和生物信息学分析能够得到mrna、lncrna、circrna的鉴定及注释信息。不过该---构建时会进行片段化选择从而滤掉了small rna的信息，所以需要另外再构建一个small rna---，进行测序分析后可以得到mirna和其他small rna的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示：

二、使用说明

1、装载探针

对于---时间较短通常为2小时以内的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞。对于细胞---

时间较长通常为6小时以上的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞，后装载探针。

原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无培养液稀释dcfh-da，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，---多少钱，加入适当体积稀释好的dcfh-da。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的dcfh-da的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。